Real-time PCR与RT-PCR比较
已有 200 次阅读2009-8-24 03:48
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Real-time PCR与RT-PCR是两种不同的PCR方法,适用范围也不同。
Real-time
PCR中文译作“实时聚合酶链反应”,是一种最新发展的定量PCR技术。该技术借助于荧光信号来检测PCR产物,一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到
PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据CT值确定起始DNA拷贝数,做到了真正意义上的DNA定量,较以往常用
的终点定量的方法更加准确。根据所使用的技术不同,荧光定量PCR又可以分为TaqMan探针和SYBR Green
I荧光染料两种方法。Real-time
PCR所采用的专用PCR仪能够自动在每个循环的特定阶段对反应体系的荧光强度进行检测,实时的记录荧光强度的改变,从而对样品的浓度进行精确的定量。
RT-PCR是Reverse transcription PCR的简称,中文译作“逆
转录聚合酶链反应”,是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成
cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆
特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。无论使用何种RNA,关键是确保RNA中无RNA酶和基因组
DNA的污染。用于反转录的引物可视实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT
及基因特异性引物中的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA,三种都可。
但二者的基本原理是相同的,即PCR技术。